小鼠基因編輯(CRISPR/Cas9 system)服務

小鼠基因編輯(CRISPR/Cas9 system)服務

圖爾思生物科技公司為台灣最早開始推展CRISPR/Cas9技術且為最先開始利用此系統提供客製化的基因編輯小鼠與大鼠。我們利用in vitro transcripted sgRNA與獨有的Cas9 protein,在單一個受精卵時期用microinjection方式將材料打入,六至八週九可以產出F0小鼠。

服務內容

確認基因編輯內容與小鼠品系後,會直接設計合成出sgRNAmRNA並且搭配圖爾思獨家開發的Cas9重組蛋白,經由顯微注射直接將Cas9蛋白和sgRNA注射到小鼠胚胎,這樣不但可以省去plasmid轉出蛋白的過程,還可以確保CRISPR/CAS9在胚胎中一定有作用

 

 

實驗交期:

1.CRISPR/Cas9 套組:3-4
2.老鼠基因編輯服務:約6-8

服務流程

樣本需求

1.欲敲除的基因詳細資訊

2.執行基因編輯之基因詳細資訊(Gene ID)

出貨規格

針對micerat我們會提供至少一隻F0 heterozygous or mozaic mice/ rat及定序報告(不包含off-target分析)

常見問題

1. Q:鼠品系?

A: : 我們使用C57B6J

 

2. Q:幾顆胚胎?

A: 我們一次會打100-200顆胚胎,最多總共打400顆,若無產出目標小鼠,則終止服務。

 

3. Q:鼠 Knock in 有哪些方式?

A:

(1) point mitation (單個核甘酸置換): 需要一個sgRNAsingle stranded  donor DNA (200 bp)

(2) OverexpressionRosa 26 locus插入想要表達的基因序列,需要一個sgRNAdonor plasmid (2K)

(3) Conditional KO: 在目標基因序列的某個exon兩端intron插入兩個loxp序列,需要兩個sgRNAdonor plasmid (2K)

 

4.Q:客戶拿到的F0小鼠是homozygous還是heterozygous?

A: 一般來說得到homozygous的機率不高,有的時候會得到(鑲嵌型) chimeric 小鼠,全身只有5%或更低的細胞有mutation(還是會有germline transmission),但是只要和wild type小鼠交配,就可以得到heterozygous子代。

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