博士案件Book分享-即時定量聚合酶連鎖反應服務Quantitative real-time PCR service

發佈日期:2020-02-24

圖爾思生物技術服務(SuperLab)的理念就是成為台灣最強的第三方委外檢測實驗室。最近我們接受了一個非常有趣的委託案件。

 
  本次接受的個案,一開始以為是單純的即時定量聚合酶連鎖反應服務(Quantitative real-time PCR service),這個案件從樣品的RNA萃取、cDNA合成到qPCR上機的步驟客戶都委託我們進行,當我們和客戶溝通完實驗設計與案件目標後,根據豐富的經驗,我們隨即發現了可以進行優化的步驟與細節,並馬上與客戶進行溝通。在更深入的了解後,得知客戶的真實需求其實是想要檢測從其他實驗室得到的這個檢測流程是否符合他們的需求,才因而委託我們進行驗證,既然如此,我們當然二話不說按照客戶的要求進行驗證。

 

 

  經過圖爾思生物技術服務團隊謹慎小心且多次重複驗證後,果不其然,這個從其他實驗室得到的檢測方法並不完全符合客戶的期待。於是我們馬上就跟客戶進行討論並提出我們認為可以優化的方法:客戶的實驗設計是從體液的樣本中以即時定量聚合酶連鎖反應(qPCR)偵測特定miRNA的實驗,一開始的total RNA在萃取過程中,我們發現原本的操作步驟是將Trizol / CHCl3作用後的水層盡可能完全的取出並進行下一步沉澱,但是在珍貴樣品或是目標萃取物含量少的情況下,這樣的作法勢必會損失大量的total RNA,更何況原本的操作流程只取了2/3的量,而且必須根據沉澱出來的RNA決定其溶解的最小體積以得到高濃度的RNA接續後面的實驗,並非統一回溶體積;另外,原本的操作方法是在每個樣品萃取前需加入合成的mirRNA片段當作每個樣品中的internal control,但我們發現加入的劑量可能會影響qPCR的偵測極限,所以我們最終也提供給客戶優化的檢測方式。

 

 

  一段時間後,這位客戶也使用我們所建議的方法修改檢測方式,並且完美的得到他們想要看到的實驗結果。想到我們能為客戶解決科研實驗上的問題,就不自覺地露出開心的微笑,請您放心把技術服務交給SuperLab團隊!

 

 

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