Positive Control siRNA

Positive Control siRNA

RNA interference (RNAi) is the best way to effectively knock down gene expression to study protein function in a wide range of cell types. Traditional RNAi methods for gene knockdown in mammalian cells involved the use of synthetic RNA duplexes consisting of two unmodified 21-mer oligonucleotides annealed together to form short/small interfering RNAs (siRNAs).

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產品特點

TOOLS Chemically-Modified siRNA results in greater longevity in cell culture and stability in cell culture and in serum, enhancing the ability for this to be used for in vitro or in vivo applications and has much more extensional effective time than Standard siRNA. 

 

 

常見問題

Q1.siRNA建議施打方式為何?

A:小鼠(15-20g)打3-4nmole, 大鼠30-40nmole,施打頻率建議參考其他文獻

 

Q2.siRNA有沒有建議搭配的Transfection Reagent?

A:建議可選擇TOOLSmartFect Transfection Reagent,若有其他廠牌的siRNA Transfection reagent亦可使用

 

Q3.要如何確認客戶使用siRNA的轉染效率?

A:基本上要先確認positive是否有knock down的效果,在來辨識細胞FAM螢光有沒有感染成功,最後來可以藉由觀察細胞的型態,再調整加重或減少Transfection時的siRNA及reagent比例

 

Q4.TOOLS提供的siRNA的Negative control序列是否皆為一樣?

A:是的

 

Q5.FAM-labeled Negative control transfrction多久以後可以觀察螢光?

A:經實際測試,當細胞數量約50%,使用 siRNA濃度30-150nM進行Transfection 6-8小時,待換過Medium後的24小時可以觀察螢光

 

Q6.in vivo的siRNA有什麼修飾?

A:基本上會選擇甲基氧(2-OME)及膽固醇修飾

 

Q7.siRNA設計以後我們是否能幫客戶決定哪條序列?

A:我們會幫客戶設計合適的序列,但是買單條的客戶要自行從3個設計好的序列挑選且不會有保證方案,則購買套組的客戶會直接交付這3條設計好的序列,會有保證方案 (>70%)

 

Q8.siRNA跟miRNA的negative control是否可以共用?

A:可以共用

 

Q9.siRNA及miRNA是否可以用抗生素篩選?

A:否,miRNA只是短片段的雙股RNA,沒辦法用抗生素篩選

參考文獻
  1. KO, Yi-An, et al. BLIMP-1-MEDIATED PATHWAY PROMOTES IFN-I PRODUCTION IN PLASMACYTOID DENDRITIC CELLS BY TARGETING TO IRAK-M. Frontiers in immunology, 2018, 9: 1828.

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