In vitro siRNA

In vitro siRNA

RNA interference (RNAi) is the best way to effectively knock down gene expression to study protein function in a wide range of cell types. Traditional RNAi methods for gene knockdown in mammalian cells involved the use of synthetic RNA duplexes consisting of two unmodified 21-mer oligonucleotides annealed together to form short/small interfering RNAs (siRNAs).

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常見問題

Q1.siRNA建議施打方式為何?

A:小鼠(15-20g)打3-4nmole, 大鼠30-40nmole,施打頻率建議參考其他文獻

 

Q2.siRNA有沒有建議搭配的Transfection Reagent?

A:建議可選擇TOOLSmartFect Transfection Reagent,若有其他廠牌的siRNA Transfection reagent亦可使用

 

Q3.要如何確認客戶使用siRNA的轉染效率?

A:基本上要先確認positive是否有knock down的效果,在來辨識細胞FAM螢光有沒有感染成功,最後來可以藉由觀察細胞的型態,再調整加重或減少Transfection時的siRNA及reagent比例

 

Q4.TOOLS提供的siRNA的Negative control序列是否皆為一樣?

A:是的

 

Q5.FAM-labeled Negative control transfrction多久以後可以觀察螢光?

A:經實際測試,當細胞數量約50%,使用 siRNA濃度30-150nM進行Transfection 6-8小時,待換過Medium後的24小時可以觀察螢光

 

Q6.in vivo的siRNA有什麼修飾?

A:基本上會選擇甲基氧(2-OME)及膽固醇修飾

 

Q7.siRNA設計以後我們是否能幫客戶決定哪條序列?

A:我們會幫客戶設計合適的序列,但是買單條的客戶要自行從3個設計好的序列挑選且不會有保證方案,則購買套組的客戶會直接交付這3條設計好的序列,會有保證方案 (>70%)

 

Q8.siRNA跟miRNA的negative control是否可以共用?

A:可以共用

 

Q9.siRNA及miRNA是否可以用抗生素篩選?

A:否,miRNA只是短片段的雙股RNA,沒辦法用抗生素篩選

參考文獻
  1. KO, Yi-An, et al. BLIMP-1-MEDIATED PATHWAY PROMOTES IFN-I PRODUCTION IN PLASMACYTOID DENDRITIC CELLS BY TARGETING TO IRAK-M. Frontiers in immunology, 2018, 9: 1828.

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