蛋白質轉譯後修飾分析

蛋白質轉譯後修飾分析

蛋白質在不同的生理條件下除了表現量的變化外,轉譯後修飾(post-translational modification, PTM)往往也扮演著重要的角色,傳統的鑑定方法不外乎是利用能辨認修飾位點的抗體,但也因為需要透過抗體辨認,所以會受到抗體專一性的影響與有許多的修飾位點並沒有相對應的抗體產品。而利用質譜分析的策略則能一次全面性的剖析蛋白所有可能的修飾位點,並且是直接的鑑定方法比起抗體的間接鑑定法,也增加了幾分的保障。圖爾思SuperLab提供最專業的蛋白質轉譯後修飾作用(post-translational modification, PTM)分析的服務,讓您的樣品從樣品製備上機到分析都能安心的交給我們。

服務內容

以磷酸化(phosphorylation)位點鑑定為例,圖爾思SuperLab利用蛋白酶將樣本中的蛋白質水解成小片段的胜肽段(peptide)後,經過TiO2管柱(2D-TiO2-LC-MS)時會因為親和性使得帶有磷酸化修飾的胜肽較容易進到質譜進行分析,再利用資料庫比對時將有可能接上磷酸的胺基酸設定為有可能具有磷酸化,再進一步行比對和驗證(如下圖)。

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服務流程

 

 

​實驗交期:約2-3

樣本需求
  1. 樣品類型: 染色過後之膠體樣品 (請提供染色膠圖)、免疫沉澱產物(IP beads or eluent,請提供溶液成分) 、萃取或純化之蛋白質溶液(請提供溶液成分)

  2. 樣品大小: 膠體需小於 3 mm x 8 mm x 1.5 mm (高度 x 寬度 x 厚度)

  3. 樣品總量: ≥100 ug (萃取蛋白質)、≥10 ug (純化蛋白質,純度≥50%)、免疫沉澱起始量: ≥500 ug

  4. 樣品濃度: ≥0.25 ug/uL​

  5. 分析平台: PTM-peptide enrichment, 1DLC, LTQ-Orbitrap MS

出貨規格

1. 結案報告一份

2. Raw data 一份

常見問題

Q1. 一定需要提供純化蛋白嗎?

A:如果是有想要針對研究的目標蛋白,建議提供純化後的蛋白已達到最高的sequence coverage。

 

Q2. 想做特殊後轉譯修飾可以嗎?

A: 可先參考我們的PTM list,list上方的修飾都可以做,若為特殊修飾請提供相關文獻

 

Q3. 是否能透過跑膠挖點的方式來純化蛋白嗎?

A: 可以透過跑膠挖點的方式來純化蛋白,但跑膠的方式在elution步驟時會造成部分胜肽流失。

 

Q4. 可以做O-linked glycosylation嗎?

A: 目前不提供O-linked glycosylation的服務。

 

Q5. 是否有提供enrichment的服務?

A: 我們提供磷酸化醣基化(N-linked), 泛素化這三種PTM的enrichment服務。

 

Q6. 膠體樣品有什麼限制嗎?

A: 膠體樣品請勿超過3x8x1.5mm,若膠體樣品超過此大小會酌收膠體處理費用。序列鑑定不建議給予膠體樣品,會影響peptide elution的效率,降低coverage。

 

其他常見問題請至FAQs

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