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2018．09
如何正確的溶解你的胜肽(peptide)
實驗做多了總會遇到新的挑戰需要嘗試，如同第一次遇到不會溶解的合成胜肽讓人十分困擾，這樣後續的實驗就做不下去了啊！其實遇到這樣的問題不用讓自己太崩潰，在自己之前的經驗跟解決問題的過程中，看到了一句話讓我非常的寬心：
”Selecting the best solvent may be a result of a ‘trial-and-error’ process.”
以下稍微介紹一下合成胜肽的回溶流程：
1. 一般都會建議將冷凍乾燥後的胜肽保存在-80或是-20度冰箱中，但這取決保存你樣本的容器是否完全隔絕水氣。如果有防潮箱的話其實更建議放在常溫的防潮箱內就好，這是我待過的研究單位中專業技術人員所建議的。有種樣品很麻煩，就是當你收到時已經吸收空氣中的水分揪成小塊這種一定要馬上用少量溶劑回溶後冰存在-80度冰箱中，有些合成胜肽特性就是容易潮解。
2. 計算合成胜肽的淨電荷，若淨電荷數大於0為鹼性胜肽，小於0為酸性胜肽，等於0為中性胜肽。可參考下圖。
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”Selecting the best solvent may be a result of a ‘trial-and-error’ process.”
以下稍微介紹一下合成胜肽的回溶流程：
1. 一般都會建議將冷凍乾燥後的胜肽保存在-80或是-20度冰箱中，但這取決保存你樣本的容器是否完全隔絕水氣。如果有防潮箱的話其實更建議放在常溫的防潮箱內就好，這是我待過的研究單位中專業技術人員所建議的。有種樣品很麻煩，就是當你收到時已經吸收空氣中的水分揪成小塊這種一定要馬上用少量溶劑回溶後冰存在-80度冰箱中，有些合成胜肽特性就是容易潮解。
2. 計算合成胜肽的淨電荷，若淨電荷數大於0為鹼性胜肽，小於0為酸性胜肽，等於0為中性胜肽。可參考下圖。
3. 開始回溶前，絕對不要貿然地將所有樣本一次下去測試，縱使一開始發現用純水回溶後不溶可以均質後取出少量體積往下測試，畢竟合成胜肽可是很高貴的。
A. 鹼性胜肽可先用少量純水試溶，若是發現有難溶顆粒可慢慢加入醋酸觀察溶解狀況，可用低功率的超音波震盪輔助溶解速度(不影響溶解度)，但若最終達20%醋酸濃度還是難溶的話，可以再加入TFA輔助。若是順利在其中一個流程中溶解了，就可以將合成胜肽調整到作用濃度。
B. 酸性胜肽一樣可以先用少量純水試溶，再使用NH4OH或是ammonium bicarbonate慢慢滴定，觀察溶解狀況，亦可使用超音波震盪輔助溶解速度，最終調整到作用濃度。
C. 中性胜肽以純水試溶，「通常」不用抱太大的希望，這類的胜肽最終解決的溶劑是DMSO、DMF或ACN(乙腈)。這邊需要注意胜肽鏈中含有Cys (C) 或 Met (M)在DMSO中是不穩定，建議用DMF。
A. 鹼性胜肽可先用少量純水試溶，若是發現有難溶顆粒可慢慢加入醋酸觀察溶解狀況，可用低功率的超音波震盪輔助溶解速度(不影響溶解度)，但若最終達20%醋酸濃度還是難溶的話，可以再加入TFA輔助。若是順利在其中一個流程中溶解了，就可以將合成胜肽調整到作用濃度。
B. 酸性胜肽一樣可以先用少量純水試溶，再使用NH4OH或是ammonium bicarbonate慢慢滴定，觀察溶解狀況，亦可使用超音波震盪輔助溶解速度，最終調整到作用濃度。
C. 中性胜肽以純水試溶，「通常」不用抱太大的希望，這類的胜肽最終解決的溶劑是DMSO、DMF或ACN(乙腈)。這邊需要注意胜肽鏈中含有Cys (C) 或 Met (M)在DMSO中是不穩定，建議用DMF。
但照這樣做就一定會溶了嗎？以上都是一般情況，就如同總是在寫論文的前一個月硬碟會壞軌開不了機、在趕畢業前絕對會遇到不溶的合成胜肽一樣，畢業前趕data遇過悲慘的經驗是先導測試實驗合成了20條胜肽都無法順利溶解，最算拿出最終武器DMSO還是有樣本溶解度很低，所幸當初設計的實驗可以使用DMSO往下做。但大部分的實驗用到合成胜肽是拿來當抗原使用，這就真的需要測試很多條件才能達到實驗條件的要求。
喔！對了！剛剛提到拿出DMSO還溶不好的那條合成胜肽嗎?在後續的實驗中想說接上biotin或是FITC藉由好溶的分子鍵結一起增加溶解度，但其實也是有後續實驗考量但我很挫敗的就是還是不溶。這時一定有人覺得我幹嘛糾結在這條上面，因為好死不死在先導測試跟後續的驗證它是關鍵主角，直到最後，同一條胜肽序列合成Multiple Antigenic Peptides (MAPs) 後居然溶解度大增!然後靠著這個實驗結果拿到第一張的畢業門票。這時一定會有人很困惑，不好溶的東西合成一大堆分枝應該更不好溶啊?!我只能說，回到開頭的那句話：“Selecting the best solvent may be a result of a ‘trial-and-error’ process.” 希望大家在溶解合成胜肽這件事上面可以順順利利的！
喔！對了！剛剛提到拿出DMSO還溶不好的那條合成胜肽嗎?在後續的實驗中想說接上biotin或是FITC藉由好溶的分子鍵結一起增加溶解度，但其實也是有後續實驗考量但我很挫敗的就是還是不溶。這時一定有人覺得我幹嘛糾結在這條上面，因為好死不死在先導測試跟後續的驗證它是關鍵主角，直到最後，同一條胜肽序列合成Multiple Antigenic Peptides (MAPs) 後居然溶解度大增!然後靠著這個實驗結果拿到第一張的畢業門票。這時一定會有人很困惑，不好溶的東西合成一大堆分枝應該更不好溶啊?!我只能說，回到開頭的那句話：“Selecting the best solvent may be a result of a ‘trial-and-error’ process.” 希望大家在溶解合成胜肽這件事上面可以順順利利的！
