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06 2022.12

3D培養類器官-人類疾病研究新利器

目前在癌症研究當中使用2D培養系統,大部分仍無法作為臨床試驗的理想模型,而3D培養(3D culture)系統,則可以解決這樣的瓶頸,因為3D培養能夠模擬體內組織或器官的微環境(microenvironments)、能夠表現出細胞與細胞之間的直接作用(cell-cell interaction)、基因/蛋白表現能夠更接近體內的表現、觀察臨床藥藥物抗性(drug respones)的問題、觀察細胞氧氣、養分與細胞素的訊息傳遞。

 

3D培養型態

根據細胞來源可以分化成不同種的3D結構細胞,細胞來源來自於成體幹細胞(Organ-specific adult stem cell)或多功能幹細胞(如:iPSCs, ESCs)並透過添加不同的生長因子(如:BMP, EGF, FGF等),可將細胞發展成類器官(organoids);若是一般的癌症疾病的研究可以利用極低貼附性表面培養盤(Ultra-Low Attachment, ULA)、凝膠(hydrogel)、透過支架(scaffold)等的方式讓細胞形成3D結構(spheroid)。

 

▶▶Croyez提供類器官研究相關細胞因子蛋白:


 

3D培養結構建立

那我們應該如何建立3D結構模型呢?主要可以分為三種類型,無支架(scaffold-free)、支架(scaffold-base)和混合體(hybrid)。

Scaffold-free:可以利用特殊培養盤(Ultra-Low Adherent Plate)、懸滴培養(Hanging drop)、轉瓶式生物反應器(Spinner flask bioreactor)等,使細胞自行形成球狀結構(spheroid)。

Scaffold-base:則利用天然材料(collagen, gelatin)或合成的材料(polymer),形成凝膠狀(hydrogel),讓細胞能夠接種在膠體裡,從而形成球狀結構。

Hybrid:3D列印結構(3D printing)、器官型培養模式(organotypic raft culture)、微流體晶片(organ-on-a-chip)等方式建立3D培養模型。

圖爾思提供Scaffold-base 3D培養試劑:


TOOLS 3D Culture Plus Kit (#TTL-3D48)

產品特色:

  • Scaffold-base原理並真實模擬in vivo生長模式
  • 結構穩定不擠壓細胞骨架與胞器
  • 基質快速凝膠化、品質穩定、操作便利
  • 使用專用溶解配方、不影響細胞活性、收集完整spheroids
     


HCT116細胞培養在TOOLS 3D Culture Plus Kit,經過不同時間觀察,細胞能夠形成完整的spheroid
 

癌症腫瘤研究

  為了探討因RAG1和RAG2缺陷,引起的嚴重複合型免疫缺乏症(SCID),Cameron L. Gardner團隊,將RAG2 knock-in到iPSC,並建立人工胸腺類器官(artificial thymic organoid, ATO),從而維持RAG2的基因表達,實驗證明利用CRISPR技術可將RAG2缺陷的細胞恢復到正常水平(1)。此外也可以利用轉染試劑(transfection reagent),將特定的基因轉染到3D培養並以螢光顯微鏡觀察可能的蛋白表現。

 

▶▶Synthego提供高優質基因編輯CRISPR工具

  • 擁有工程學背景與革新基因編輯工程技術
  • >90%的高編輯效率(Editing Efficiency)
  • 低脫靶效應(Off-target Effects)
  • 應用細胞範圍廣(包含primary cells & stem cells)
  • 提供業界最高品質、高純度sgRNA&Cas9


 

利用Synthego sgRNA以電穿孔將3個目標基因送入U2OS細胞,結果顯示有>90%的編輯效率。

如果有任何關於Synthego CRISPR sgRNA應用在organoid或spheroid的詳細資訊
●​點我了解。
 

使用TOOLSFect將目標基因轉染到U87MG spheroid。並過螢光顯微鏡觀察細胞,顯示出spheroid具有高轉染效率的表現

 


TOOLSFect transfection reagent (#TTM-TF01)

產品特色:

  • 轉染前、後皆無須更換細胞培養基
  • 產品配有獨特配方,無須額外準備其他無血清培養基作為溶液
  • 經實驗證明,經轉染後的細胞存活率高
  • 經多種細胞株證實,成功轉染率高

 

▶▶ABclonal提供類器官研究相關抗體:


 

蛋白質體學的研究

  癌症疾病中許多上皮組織的細胞極性(Apical-basal cell polarity)的管腔(lumen)結構受到破壞,因此Li-Ting Wang團隊利用Caco2細胞建立3D管腔結構(lumen formation),以蛋白質體學與功能驗證篩選出PARD3B、RALB 和 HRNR,能夠作為管腔形成的新調節劑(regulator) (2)。除了常見的癌症研究之外,Thayna Mendonca Avelino團隊為了了解因肥胖引起代謝失衡及相關機制研究,也可利用脂肪細胞(3T3-L1)以3D方式培養,透過LC-MS/MS分析球體與小鼠脂肪組織,而3D培養與動物組織有83%共有蛋白並發現肥胖參與的路徑有脂肪生成(adipogenesis)、 脂肪酸代謝(fatty acid metabolism),因此3D培養能夠做為良好的模型(3)。

圖爾思提供精密的質譜分析服務(Mass Spectrometry),並依照客戶的實驗需求,(A)給予完整的蛋白質體學分析服務,從萃取、上機、生物資訊分析,產出完整的實驗數據與(B)客製化製圖服務


(A)
 
(B)

 

 

Reference:

Cameron L Gardner et al. Gene Editing Rescues In vitro T Cell Development of RAG2-Deficient Induced Pluripotent Stem Cells in an Artificial Thymic Organoid System. J Clin Immunol. 2021 Jul;41(5):852-862.

Li-Ting Wang et al. A proximity proteomics screen in three-dimensional spheroid cultures identifies novel regulators of lumen formation. Science Report. 2021; 11, 22807.

Thayna Mendonca Avelino et al. Mass spectrometry-based proteomics of 3D cell culture: A useful tool to validate culture of spheroids and organoids. SLAS Discovery. 2021; Volume 27, Issue 3, 167 - 174.

 

 

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