CRISPR出你的理想細胞: Knock-in & Knock-out葵花寶典
CRISPR 是通過 Cas9 酵素辨認出指定基因序列 (PAM, protospacer adjust motif) 並結與目標序列互補的引導 RNA (guide RNA)，形成複合體使其切斷 DNA，並透過兩種修復機制 HDR (Homology-directed repair) 或 NHEJ (Non-homologous end joining) 以達到基因編輯。
其中 NHEJ 主要是利用 DSB (Double strand break) 的方式直接與末端連結達到 Knock-out 的編輯；而 Knock in 則是一種在基因組中插入外來基因的技術，通常使用 HDR 來實現，因此可以用來研究特定基因的功能，或者創造具有新功能的細胞或生物體。
圖一、CRISPR/Cas9 用於雙鏈斷裂，修復可以通過NHEJ或HDR進行，其中NHEJ指非同源末端連接修復，HDR指同源重組修復
Synthego 所提供的 sgRNA (single guide RNA)，是由 crRNA 和 tracrRNA 結合而成，長度約為 100 nt，不需要組裝即可以使用。此外，sgRNA 經特殊化學修飾從而提高編輯效率、特異性和穩定性，使研究人員更容易進行基因編輯。而經化學修飾的 sgRNA 的編輯效率高達 80% 。
圖二、Synthego 提供化學合成的 sgRNA
圖三、Synthego CRISPR-Cas9 在不同的 gRNA 編輯效率
此外應該如何有效的進行 CRISPR 編輯呢？Synthego 根據自身的研究經驗，提供了不同種的方式進行傳遞，可以達到良好的編輯效率，並針對不同的細胞有提供一系列的 protocol 可以參考，包含 immortalized cells、CD4+ T cells、iPS cells 等。
>> CRISPR Protocol 傳送門
而 Synthego 提供一站式解決方案，並提供高品質且自動化的 Cell pools 和 Cell clones，減少科學家花時間建立編輯後的細胞，將時間專注在自己的研究上。
而目前他們可以針對 iPSC 細胞與永生化細胞 (Immortalized Cells) 提供>95% knock-out 編輯效率。儘管沒有適用於所有細胞的通用 CRISPR 編輯方法，Synthego 自動化的流程能夠一次測試 200 種編輯參數並從中優化出最好的方式，並已對 15 種組織類型，超過 100 個人類細胞系中實現高 knock-out 的編輯效率。
圖四、Synthego 的 細胞編輯過程中，利用強大的自動化工作流程，來確保每個編輯過的 cell pool 或 cell clone 都包含高品質的編輯效率並且沒有污染物的殘留
圖五、Synthego 在不同人類細胞株中，在簡單、中等和具有挑戰性的細胞和組織類型中觀察到高編輯效率。顯示了相對 b) 容易（紅色）、c）中等（綠色）和 d) 具有挑戰性（藍色）的範例細胞株（用 * 和顏色表示）。
Synthego 提供不只是 CRISPR 用的材料，也針對不同細胞株給予不同的基因編輯教戰指南、甚至可以提供高編輯效率的細胞株。
你還在猶豫嗎？讓 Synthego『守住你的時間、共創你的研究！』
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