本研究比較了傳統水浴槽和 VIA Freeze™ 系統在冷凍 CD3+ T 細胞解凍後的表現差異。結果顯示，兩種方法在解凍後的細胞回收率和存活率方面均無顯著差異，顯示 VIA Freeze™ 的解凍表現與傳統水浴槽相當。重要的是，VIA Freeze™ 系統提供了一個乾式無污染風險的密閉解凍方案，並能自動記錄溫度、時間、操作人員等數據，支持可追溯性與 FDA 21 CFR Part 11 合規性，使其成為細胞治療早期流程中標準化解凍的理想選擇。

▌引言

解凍細胞凍管是細胞治療製造過程中的一個重要環節，根據使用的方法會影響細胞的活性和功能，這突顯了標準化解凍程序對於患者一致劑量的重要性。傳統上，細胞凍管是在 37°C 的水浴槽中解凍的，這種方法存在污染風險，需要校準和驗證，此外，水浴槽無法提供解凍過程的任何記錄。

在細胞治療製造中，從採集到回輸的可追溯性是簡化監管申報的關鍵。除了實現合規性之外，記錄解凍細節 (例如溫度監測、解凍時間和操作人員 ID)，也有助於確保解凍過程的可重複性，並協助研究人員將解凍條件與細胞活性與性能結果聯繫起來。

隨著細胞治療領域的發展，細胞凍袋和細胞凍管的使用越來越多，具體取決於開發階段和規模。凍袋通常用於臨床和商業製造，而凍管則常在早期研究、臨床前研究和小規模臨床試驗中更受青睞，因為它們的靈活性和易於操作處理。理想情況下，如果能夠獲取細胞凍管的解凍過程數據，將有助於從細胞凍管過渡到細胞凍袋，但目前能夠準確記錄此類資訊的解決方案卻十分有限。

VIA Freeze™ 程序降溫儀旨在冷凍保存各種類型細胞，同時符合美國食品藥物管理局（FDA） 21 CFR Part 11（電子簽名記錄）的規定。該系統的加熱模組結合其數據收集能力，可以在密閉系統中精確控制細胞凍管解凍過程。本研究評估了 VIA Freeze™ 系統中的加熱組件與相應的 SBS 板相結合，用於解凍冷凍保存的 CD3+ T 細胞小瓶的性能，並將其與水浴進行比較。

▌方法摘要

冷凍（Cryopreservation）： T 細胞以 CryoStor CS10（10% DMSO）調整至 1×10⁷–2.5×10⁷ cells/mL，分裝於 2 mL 冷凍管後，使用 VIA Freeze 以 –1°C/min 冷卻至 –100°C，再轉入 –196°C 液態氮長期保存。

解凍（Thawing）：每位 donor 的樣本分別以： 
37°C 水浴 和 VIA Freeze Duo（預熱至 37°C，升溫 1.5°C/min）， 兩組皆於冰晶大部分融化時視為解凍完成，並記錄解凍時間。 後續處理與分析：解凍後立即洗滌移除 DMSO，並培養至 72 小時；使用 NC-200（AO/DAPI）於 T0、24、48、72 小時評估活性與細胞回收率。 


▌結果

使用 VIA Freeze™ 系統和水浴槽測定解凍後 (T0) 細胞的存活率或回收率方面均未觀察到統計上的顯著差異。
 

解凍後立即（T0）觀察到的平均細胞存活率，使用 VIA Freeze™ 系統為 97.49% ± 1.85%，使用水浴法為 97.72% ± 1.75%。平均細胞回收率，使用 VIA Freeze™ 系統為 94.7% ± 4.5%，使用水浴法為 96.6% ± 4.6%。


VIA Freeze™系統的解凍效果與水浴槽一致

在超過 72 小時的培養過程中，各解凍方法在任何時間點的細胞存活率和總活細胞數均未觀察到顯著差異。這些結果表明，在所測試的條件下，對於冷凍保存的 CD3+ T 細胞的解凍效果，VIA Freeze™系統與水浴槽的解凍能力相當。

表1. 細胞活力和總活細胞計數結果（n = 5）VIA Freeze™ 系統與水浴槽在解凍性能方面唯一具有統計意義的差異是時間：使用 VIA Freeze™ 系統解凍的細胞平均比水浴槽慢 95 秒（VIA Freeze™ 系統和水浴槽的平均解凍時間分別為 221 ± 8 秒和 127 ± 3 秒；PJ≤0.001145）。此差異對所分析的任何時間間隔內的細胞存活率與回收率均無影響。

【VIA Freeze 的擴充價值】 從研究結果與官方技術資料可以清楚看到： VIA Freeze 的應用不僅限於控溫冷凍，而是能「向後延伸」成可靠的凍管解凍設備，讓設備本身的功能更完整、使用價值更高。

1. 標準化、可重複的解凍流程 － 加熱模組可讓凍管處於穩定37°C的乾式環境中解凍、使流程更可控並降低操作人員差異，提升批次一致性，適合製程化與臨床級應用。

2. 屏除水浴不確定性，降低溫度偏差與汙染風險 － 無水浴污染與溫度波動，更符合 GMP 與臨床流程的要求，適合對污染敏感的細胞製程。

3. 增加原有設備的效益 － VIA Freeze™ 除控速冷凍功能外，其加熱模組亦可做凍管解凍，讓使用者可於單一平台整合凍存與解凍資料，減少額外添購解凍裝置需求並提升設備使用率。


文章出處：
https://www.cytivalifesciences.com/en/ch/insights/cell-thawing-with-the-via-freeze-system?__cf_chl_rt_tk=F623tdg2R3mEhKm2D7dYkYjf4EUXXli8sNmlnXpP8O4-1763476271-1.0.1.1-35EBiNXCLAP.F6tqx7ffaDanY7Ev_IcceAy_3nSSkkI