1. RNA總量:
 

   1. PacBio平台定序: ≧ 6 ug (Total RNA)
 

   2. RNA 濃度: ≧ 300 ng/ ul
       樣品體積: ≧ 20 ul

 

樣品建議：

血液

1.        全血5 mL (建議10 mL)，建議冷藏盡速送樣

2.        Buffy coat 0.5 mL (建議3-5 mL)，-80度保存及運送

組織

1.      新鮮檢體1 g (建議3-5 g)，-80度保存及運送

植物

1.      新鮮組織或者幼苗/嫩葉 1 g (建議3-5 g)，萃取DNA後-80度保存及運送。

2.      成熟部位像是根、莖、種子等建議2倍送樣量，萃取DNA後-80度保存及運送。

3.      單細胞藻類1 g (建議3-5 g)，萃取DNA後-80度保存及運送。

4.      大型藻類則建議 3 g 以上，萃取DNA後-80度保存及運送。

動物 (人/鼠胸腺、脾臟、胰臟、及FFPE除外)

1.      新鮮組織1 g (建議3-5 g)，-80度保存及運送

細胞

1.      1x106-1x107 細胞，-80度保存及運送

其他注意事項

1.            RNA定序樣品在品質上要求較高，尤其要利用三代定序直接看全長轉錄本的優勢，樣品建議RIN > 8 無降解且無雜質汙染

2.            使用全血樣品需加入EDTA抗凝劑，避免反覆凍融或放置時間過長

3.            全血樣品可加入Trizol

4.            植物組織像是多醣多酚類植物如中藥材等，或是潮濕環境樣品容易有汙染需特別留意

5.            脊椎/節肢動物等樣品建議採用新鮮動物組織 1 g以上，若為核酸較少部位像是脂肪、皮膚、骨頭等則視情況增加送樣量

6.            動物組織需於低溫操作進行，盡可能在3-5分鐘內完成樣品的採集及處理，取樣已滅菌器械剪碎至米粒大小至入冷凍小管，液態氮速凍

7.            動物組織取樣避免壞死、發炎組織

8.        建議不要使用胰蛋白酶切下細胞，胰蛋白酶可能會破壞細胞膜上的膜蛋白導致細胞破裂，流出的核酸酶可能會使得RNA降解

9.            細胞收下後以PBS潤洗，低速離心收集pellet，可置放於Trizol混和均勻

10.        細胞發炎或凋亡狀態會影響RNA品質，萃取容易有RNA降解情形發生