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26 2022.04

3D培養之小兵立大功的球狀多細胞



3D培養的技術發展至已有十年之久,各式各樣的材料與應用也越來越成熟,在越來越多的文獻中已經被報導,3D 培養能夠模擬in vivo 細胞微環境(microenvironments )是2D培養所達不到的,優點如下:
  1.  in vivo-like: 能夠模擬體內組織或器官的生長環境,細胞生長速度也更近於自然生長情況,非2D平面培養的快速生長。
  2. Cell morphology: 細胞能夠聚集或者形成球狀多細胞(Multi-cellular spheroid),非2D培養的平面單層細胞。
  3. Cell Stiffness: 細胞所承受的剛性能更接近生物體內的低剛性細胞基質(> 4000 Pa),讓細胞生長型態更接近自然型態
  4. Cell-cell interaction: 更接近於體內環境的細胞-細胞外直接之間的作用,幫助球狀多細胞的形成。
  5. Gene/protein expression: 細胞不管是在基因表現、mRNA剪切、拓撲學 (Topology)與細胞生化特性等都更接近體內環境
  6. Drug responses: 在藥物反應上也會表現抗藥性,類似患者體內的實際投藥情況,這是2D培養很難觀察到的現象。
  7. Access to essential compounds: 3D培養的球狀多細胞,在對於氧氣、養分、細胞素與訊息傳遞分子等也都更接近於真實體內。
目前3D培養的種類可以分成scaffold-based與scaffold-free兩種,都能將目標細胞培養成球狀多細胞:
  • Scaffold-based系統: Hydrogel、Nanoparticle incorporated、Microsphere、Decellularized、Fibrous與3D bioprinted等
  • Scaffold-free系統: Liquid overlay、Hanging drop、Spinner flask bioreactor等

Scaffold-based與Scaffold-free兩種系統在3D培養都有廣泛科學家在使用,Scaffold-based系統可以利用天然或者合成的材料來做為細胞培養基質,將培養的細胞接種鑲嵌在膠體裡面,模擬在人體細胞或組織的體內環境,讓細胞成長成多球狀,而Scaffold-free則是將細胞培養在培養基裡面,利用攪拌或者重力方式幫助細胞成多球狀。

Scaffold-based的培養不僅可以幫助細胞形成多球狀,也能進行多細胞共培養實驗,可以直接在96孔盤培養並進行各種體外的測試或者藥物篩選,也能夠直接進行螢光觀察,Scaffold-free僅能作為多球狀細胞培養,無法直接在培養容器進行體外細胞測試。

球狀多細胞形成是利用Cell-ECM作用以整合素(Integrin)將細胞做聚集,再利用Cell-Cell作用以鈣黏素(cadherin)結合變成球狀。形成球狀的多細胞可以模擬體內更真實的生理情況,像是腫瘤所形成的球狀多細胞,內中外層的細胞就處於不同的生長階段,會因為內外層的差異,導致氧氣、二氧化碳、營養物質、細胞素、訊息傳遞分子,甚至是藥物等的濃度差異,形成內層缺氧、缺營養物質、高二氧化碳濃度,導致缺乏氧氣與營養物質,處於壞死狀態,中層呈現生長靜止狀態,外層是生長狀態,能夠表現出實際體內的抗藥性作用,可表現低氧現象(hypoxia),可觀察到球狀多細胞的外間質膜(ECM) ,還可進一步進行共同培養(co-culture)等研究。

現行用於3D的細胞種類有間質幹細胞(MSCs)、誘導性全能幹細胞(iPSC)、原代腫瘤細胞(primary tumor cell)、永生細胞株 (Immortalised cell line),許多實驗有在進行,如細胞分化(differentiation)、轉移(metastasis)、侵襲(invasion)、基因表達、訊息傳遞、藥物篩選等各式研究圖爾思Tools 3D culture kit是Scaffold-based的Hydrogel,它能幫助細胞形成球狀多細胞,提供適合細胞成長的微環境。其快速方便的操作,讓使用者可以在30分內完成凝膠進行實驗,在實驗結束,融膠回收細胞的時候也不需要添加Trypsin融膠,只需添加我們融膠(solving)緩衝液,即可無痛高效回收細胞進行後續實驗。
  • 產品規格
    TTL-3D48 48 rxn & TTL-3D480 480 rxn
     
  • 產品特色
    擬真:Scaffold-base原理,細胞真實模擬in vivo生長模式
    穩定:不擠壓細胞骨架、胞器
    快速:專利配方,基質能快速凝膠化,品質穩定、操作便利
    簡單:專用基質溶解配方,輕鬆收集完整的Spheroids
     
  • 點我了解產品 TOOLS 3D Culture Plus Kit
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